纸片法:有定量抗菌药物的药敏片，贴在已接种了待测试致病菌的琼脂培养基表面上，培养一定时间后观察抑、杀菌效果。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现不同大小的抑制致病菌生长而形成的“空圈”，称为抑菌圈。抑菌圈的大小与致病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系；与药物对测试致病菌的MIC呈负相关。

贴药敏纸片操作示范：

1、在无菌条件下，将镊子在酒精灯上火焰灭菌后略停，取药敏片贴到培养基平皿表面。

2、为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。纸片一旦与平板接触，不应再移动。

3、药敏片能有规律的分布于平皿培养基上，每个纸片中心间距不得少于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。

4、贴上纸片15分钟内，须把平板倒放在恒温箱中。

5、平板最好单独摆放，不超过2个可以叠在一起，否则中间平板因达不到培养箱的温而产生扩散作用。

6、要根据致病菌的特性，恒温培养一定的时间后，观察效果。

7、NCCLS VAST-AWG推荐的水生动物致病菌纸片扩散法标准化试验（2003）。

最后，结果判断：

根据抑菌圈的大小作出评判，抑菌圈越大，说明该菌对此药物越敏感，反之就敏感性越差，若无抑菌圈形成，就说明该菌对此供试药物具有耐药性。以敏感(S)、中介(I)或耐药(R)的形式作为结果判定。